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http://rdu.iquimica.unam.mx/handle/20.500.12214/1271Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.rights.license | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0 | es_MX |
| dc.contributor | Jiménez Sánchez, Arturo | - |
| dc.creator | Ricardo D. Flores Cruz | - |
| dc.date.accessioned | 2020-12-08T22:43:25Z | - |
| dc.date.available | 2020-12-08T22:43:25Z | - |
| dc.date.issued | 2020 | es_MX |
| dc.identifier.uri | http://rdu.iquimica.unam.mx/handle/20.500.12214/1271 | - |
| dc.description | En el presente proyecto se sintetizó una familia de compuestos orgánicos con propiedades fluorescentes modulables, para ser utilizados como sondas moleculares en la medición de parámetros químicos y fisicoquímicos en membrana mitocondrial. El cambio en la emisión de fluorescencia que presentan las moléculas según sus diferentes propiedades químicas fue la herramienta que ayudó a calibrar la variación en las propiedades del medio o en algunos casos, poder medir la concentración de un analito. A la familia de compuestos fluorescentes sintetizada se les conocen como cromenilios-cianinas (CCy). En general las moléculas presentaron emisión de fluorescencia dual, con valores de rendimientos cuánticos de fluorescencia de bajos a moderados (Φf = 0.03 - 0.54). Las moléculas fueron lipofílicas con valores de coeficientes de partición entre -0.19 y 0.56. Las sondas presentaron equilibrios ácido-base que daban lugar a la formación de tres diferentes especies, que tenían intensidades disímiles de fluorescencia según su cambio estructural. Se observó un comportamiento solvatocrómico similar entre las sondas cuando se encontraban en diferentes medios, con una diferencia notable entre los disolventes próticos y no próticos. Se estudió la dependencia de las sondas con los cambios en acidez, polaridad, viscosidad y la sensibilidad a la oxidación con algunas especies reactivas de oxígeno. Después de realizar la calibración de los cambios de fluorescencia y de determinar las posibles interferencias ex situ, se realizaron los correspondientes estudios en cultivos celulares, para lo que se utilizaron células tipo HeLa y SK-LU1. Las moléculas presentaron localización en membrana mitocondrial principalmente, debido a que en su forma ácida presentan carga positiva, la cual interactúa con el potencial negativo de la membrana mitocondrial (-180 mV) y también gracias a su lipofilicidad que le permite permear a través de la membrana plasmática. Lo anterior se corroboró con estudios de colocalización con marcadores fluorescentes comerciales utilizados como estándar. En los estudios en cultivos celulares se observó una mínima citotoxicidad, para todas las moléculas se obtuvo un IC50 mayor a 100 mM. Para el caso de la sonda denominada CCy (1), fue posible realizar algunos estudios de fluorescencia ultrarrápida y compaginarlo con algunos estudios in vivo en el modelo biológico, pez cebra. De los estudios de fluorescencia resuelta en tiempo fue posible elucidar los diferentes procesos fotofísicos que rigen a la molécula, entre los que se pudieron identificar, un proceso de transferencia de carga y un proceso de supresión a la regla de Kasha, dependiendo del medio en el que se encontraba. Mientras que en los estudios in vivo con el pez cebra, fue posible observar un comportamiento similar a lo descrito en los estudios realizados en los cultivos celulares, demostrando el mismo funcionamiento de la sonda en un sistema más complejo. Finalmente, los estudios de citometría de flujo permitieron realizar un análisis estadístico de conjuntos de células y generar resultados más robustos para la parte analítica del tipo estímulo-respuesta con diferentes analitos. De esta forma el proyecto contribuyó a la generación de moléculas orgánicas pequeñas que pueden servir como sondas fluorescentes en diversos sistemas biológicos. También el proyecto ayuda a elucidar los diferentes procesos fotofísicos que pueden presentar este tipo de moléculas y sobre todo demostrar que en ocasiones la interpretación analítica, no debiera de ser tomada a la ligera ya que es necesario tratar de evitar cualquier tipo de interferencia. Por último, para las sondas se podrían seguir explorando otras propiedades de las moléculas, por ejemplo, estudiar la posibilidad de generar el parpadeo fluorescente con estas sondas, para realizar estudios de microscopía de súper resolución. Otro posible interés sería en la implementación de estudios in vivo en otros sistemas biológicos más complejos, aprovechando la emisión en el infrarrojo cercano, que algunas moléculas presentaron. También sería interesante poder hacer estudios comparativos con microscopía FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging) y obtener una mayor información de los tiempos de vida de fluorescencia en tiempo real en células. | es_MX |
| dc.language.iso | spa | es_MX |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | es_MX |
| dc.title | MONITOREO de propiedades químicas y fisicoquímicas dinámicas en membrana mitocondrial con sondas fluorescentes | es_MX |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | es_MX |
| dc.creator.id | 0000-0001-7295-2797 | es_MX |
| dc.subject.cti | info:eu-repo/classification/cti/2 | es_MX |
| dc.subject.keywords | Sondas fluorescentes | es_MX |
| dc.subject.keywords | Mitocondria | es_MX |
| dc.subject.keywords | Pez Cebra | es_MX |
| dc.subject.keywords | Especies reactivas de oxigeno | es_MX |
| dc.contributor.id | 0000-0002-8757-4589 | es_MX |
| dc.contributor.role | asesorTesis | es_MX |
| dc.description.pages | 130 | es_MX |
| dc.description.institution | Universidad Nacional Autónoma de México | es_MX |
| dc.educationLevel.degree | Doctor en Ciencias Químicas | es_MX |
| dc.relation.articles | Chem. Commun., 2018,54, 13997-14000 | es_MX |
| Appears in Collections: | Tesis | |
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| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
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| Caratula y agradecimientos (RDFC).pdf | 131.62 kB | Adobe PDF | View/Open | |
| Graphical Abstract.pdf | 320.15 kB | Adobe PDF | View/Open |
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